Электрофорез и радиоавтография по максаму-гилберту

Определение "Электрофорез и радиоавтография по максаму-гилберту" в ЭБНБ

В первоначальных экспериментах меченные по одному концу продукты реакций химической деградации разделяли электрофорезом в 20%-ном полиакриламидном геле в денатурирующих условиях с 7М мочевиной в трис-боратном буфере. Для успешного разделения смеси олигонуклеотидных фрагментов, отличающихся на один нуклеотид, применяли плоские пластины гелей толщиной 1,5 мм и размером 30 на 40 см, что обеспечивало необходимое разрешение и соответствовало имеющимся рентгеновским пленкам с размерами 35,5 на 43 см (или 30 на 40 см для отечественных). Для эффективного разделения градиент напряжения составлял около 30 V на см длины геля. После завершения электрофореза стекла разъединяли и гель с одним стеклом, используемым для поддержки, быстро замораживали, заворачивали в кухонную пленку Saran Wrap и экспонировали на рентгеновскую пленку, обеспечивая ее тесный контакт с гелем при помощи груза при температуре -20°С и, таким образом, не допуская размораживания геля и диффузии полос ДНК (Maxam, Gilbert, 1977). После проявления экспонированной рентгеновской пленки на ней была видна лестница полос. Начиная "читать" данный радиоавтограф снизу восстанавливали последовательность секвенированного фрагмента ДНК.
Секвенирующий электрофорез, радиоавтография и "чтение" нуклеотидных последовательностей изложены гораздо подробнее в соответствующих главах, специально посвященных этим вопросам.