Плазмидные векторы, четвертое поколение

Определение "Плазмидные векторы, четвертое поколение" в ЭБНБ

Следующее усовершенствование плазмидных векторов не столь существенно, однако практически все вектора общего назначения следующих поколений содержат эти небольшие участки и по этой причине эти векторы все же можно отнести к четвертому поколению. Первыми такими векторами явились плазмиды pSP64 и pSP65, несущие участок промоторной области бактериофага SP6 из бактерии Salmonella typhimurium, расположенный в 5'-направлении от использованного при их конструировании полилинкера плазмид pUC12/pUC13 [Melton et al., 1984]. К сожалению, в этих плазмидах β-галактозидазный ген LacZ' оказался неактивным. Позднее были сконструированы многочисленные векторы с промотором фага SP6, промоторами фагов ТЗ и Т7, фланкирующими функциональный NH₂-концевой фрагмент β-галактозидазы LacZ' содержащимся в нем полилинкером. За счет данных промоторных участков различных фагов возможно получение в системе in vitro большого количества молекул РНК, транскрибируемых с линеаризованных матриц (с обеих цепей) и находящих различное применение в молекулярной биологии. На данный тип векторов с возможностью продукции in vitro РНК-копий клонированного фрагмента ДНК выдан американский патент, принадлежащий фирме "Promega" [Jendrisak et al., 1988].

К определению нуклеотидной последовательности ДНК данные участки фаговых промоторов все же имеют некоторое отношение, хотя и не являются обязательными. Так, кроме широко применяемых универсальных "прямого" или "обратного" праймеров, иногда используют олигонуклеотидные праймеры, комплементарные данным фаговым промоторам. Главной причиной их использования является то, что они расположены несколько ближе к полилинкеру и соответственно уменьшается количество не нужных для чтения нуклеотидов самого вектора до начала вставки и, таким образом, увеличивается количество определенных нуклеотидов в клонированном фрагменте ДНК.