Регистрация секвенирующих гелей

Определение "Регистрация секвенирующих гелей" в ЭБНБ

Дорогой, но более чувствительной альтернативой дешевому методу радиоавтографии является подход с детекцией радиоактивных изотопов с помощью специальных приборов, выпускаемых рядом фирм. Так, приборы Cyclone ("Packard", США) и Phosphorlmager ("Molecular Dynamics", США) способны детектировать энергию обычно используемых для секвенирования ДНК радионуклидов (32Р, 33Р и 35S, а также и более "слабых") и работают на принципе формирования на специальном экране под действием ионизирующей радиации латентного фосфоресцирующего изображения, после сканирования которого лазерным лучом регистрируется высвобождающаяся энергия в виде голубого свечения, которое улавливается, усиливается фотоэлектронным умножителем и с помощью специальных компьютерных программ оцифровывается. Таким образом, требуется только около 10 мин для получения высококачественного изображения секвенирующего геля. Причем вся работа по закладке геля в специальную кассету происходит на свету и, более того, яркий свет позволяет "стирать" оставшееся изображение предыдущего геля. Экспозиция обычно составляет одну десятую от таковой при обычной радиоавтографии на рентгеновскую пленку. Ранее было показано, что подобные экраны способны с квадратного миллиметра геля улавливать 1 распад радионуклида 32Р и 25 - 35S, приводя, таким образом, к 100 - 250 кратному увеличению чувствительности по сравнению с обычной рентгеновской пленкой [Johnston et al., 1990].

Фирма "Packard" производит прибор Instantlmager, способный осуществлять мгновенную радиоавтографию. Его микроканальный детектор массива данных позволяет детектировать различные радионуклиды, включая 32Р, 33Р и 35S, обычно используемые для секвенирующего электрофореза, причем время получения окончательных результатов составляет одну десятую от описанного выше способа с использованием фосфоресцирующих экранов и одну сотую от обычной радиоавтографии.